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一文帶你學會Cy7試劑的操作步驟
發布時間:2022-10-12   點擊次數:294次
  Cy7試劑是各種花菁染料及其衍生物,常被應用于生物分子標記,熒光成像及其他熒光生物分析。它們廣泛用于標記多肽、蛋白質和核酸等。Cy7是近紅外花菁染料。
 
  氨基活性的Cy7,近紅外熒光染料。此試劑可被用于產生Cy7-標記的生物分子,用于后續的小動物活體成像研究,藥物設計及相關實驗。Cy7中心加強聚亞甲基鏈的結構特點,與母結構相比其量子產率提高了20%,增加了其熒光亮度。
 
  Cy7試劑的操作步驟:
 
  水溶性Cy3NHS標記anti-GST多克隆抗體市場上買到的抗體如果含有其它蛋白或帶氨基的緩沖液會影響標記,在標記前需純化。
 
  1、在1L0.15MNaCl溶液中透析anti-GST抗體,常溫透析4小時。
 
  2、在4°C用新鮮的1L0.15MNaCl溶液再透析過夜。
 
  3、第二天用1L0.1MNaHCO3(pH8.3)透析4小時。
 
  4、用0.22µm注射器過濾頭過濾抗體溶液。
 
  5、用0.1MNaHCO3稀釋少量的抗體,在280nm處測其紫外吸收值計算標記抗體的總量。
 
  6、用DMSO配置Cy3NHS(MW765.95)溶液濃度為10mg/mL;計算所需體積以得到想要的CyDyeNHS和抗體的比值(例如20:1),然后慢慢將其加入到抗體溶液中,同時在暗處常溫緩慢攪拌45分鐘。
 
  7、用1L0.15MNaCl溶液常溫避光透析4小時除去未標記上的Cy3。
 
  8、在4°C用新鮮的1L0.15MNaCl溶液再避光透析過夜。
 
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